動物源食品中氯霉素檢測的固相萃取方法
（PolyClean X-HLB）
一、實驗目的
本法為以Polyclean X-HLB (60mg/3mL)柱開發的針對動物源食品(禽肉、畜肉和水產品)中氯霉素樣本前處理凈化方法，HPLC法作為檢測手段。Polyclean X-HLB (60mg/3mL)柱凈化效果良好，回收率滿足測試要求，重現性好，與知名廠商同型號柱性能相當。
二、實驗目標物
氯霉素(CAS:56-75-7)
三、應用范圍
本方法適用于動物源性食品(禽肉、畜肉和水產品)中殘留藥物的檢測。
四、參考標準
《農業部1025號公告-21-2008動物源食品中氯霉素殘留檢測氣相色譜法》
五、實驗材料
NuAnalyticalPolyCleanX-HLB固相萃取柱60mg/3mL，W品牌HLB固相萃取柱60mg/3mL。
六、實驗方法
1、樣品待測溶液制備
取5±0.05g豬肉樣品，于50mL離心管中，加入20 mL乙酸乙酯混合2min，4000 r/min離心15 min，取上清液于另一離心管中，再用20 mL乙酸乙酯重復提取殘渣1次，合并兩次提取液，并加入500 μL氨水，于45 ℃旋轉蒸發近干，加入500 μL甲醇混合1min，加入10 mL4%NaCl渦旋混勻10 s，加入10 mL正己烷搖勻20次，4000r/min離心5 min，棄去上層，再用10 mL正己烷脫脂一次，最后加入500 μL氨水混勻供上柱凈化用。
2、活化
依次用2 mL甲醇和2 mL水活化。
3、上樣和洗脫
取上述備用液重力作用下過柱依次用2 mL水、1 mL甲醇/乙腈/水/氨水(15:15:65:5, v/
v)淋洗上樣柱并抽干，最后用2 mL 5%氨化甲醇溶液洗脫柱子上的待測成分。
4、重新溶解
收集洗脫液，于45℃氮氣吹干，準確加入1.0 mL甲醇/水(4:6,v/v)溶液溶解殘余物混勻，0.22 μm濾膜過濾，供HPLC測定。
5、HPLC條件
色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6 mm，5 μm)
檢測器：UV@278 nm
流動相：A:水 B:甲醇
洗脫方式：等度洗脫，A:B=60:40
柱溫：30℃
流速：1.0mL/min
進樣量：20μL
七、實驗結果
1、添加水平為0.5 mg/kg豬肉基質中氯霉素(CAP)的添加回收結果
表1 添加水平為 0.5 mg/kg 豬肉基質中氯霉素(CAP)的添加回收結果
|
名稱 |
回收率（%） |
平均回收率（%） |
RSD（%） |
||
|
1 |
2 |
3 |
|||
|
氯霉素 |
92.6 |
89 |
87 |
89.5 |
3.2 |
表 2 W 品牌同型號柱，添加水平為 0.5 mg/kg 豬肉基質中氯霉素(CAP)的添加回收結果
名稱
回收率（%）
平均回收率（%）
1
2
氯霉素
90.8
91.4
91.1
名稱
回收率（%）
平均回收率（%）
1
2
氯霉素
90.8
91.4
91.1
2、添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質中氯霉素(CAP)檢測色譜圖
1 添加水平為0.5mg/kg豬肉基質中氯霉素(CAP)檢測色譜圖
