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8種常見液相色譜峰解析的分析
發(fā)布日期:2019-11-19 作者:分析測(cè)試百科網(wǎng) 瀏覽量:
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1、拖尾峰
1、
篩板阻塞
:
柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞,樣品就會(huì)在篩板部分受阻而形成時(shí)間延遲,使得樣品在柱后流出時(shí)峰型形成拖尾。
需要通過反沖色譜柱,或者更換篩板。
2、
色譜柱塌陷
:
是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失,不能對(duì)物質(zhì)形成保留,使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出,但是又還有一點(diǎn)柱效,因此形成拖尾。
需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。
3、
有污染
:
即樣品不在同一起跑線起跑,從后面開始跑得到達(dá)終點(diǎn)稍晚,表現(xiàn)出拖尾。
更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上,以沖洗柱子。
4、
流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤
:
如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動(dòng)態(tài)平衡,離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會(huì)表現(xiàn)出拖尾。
調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離,改善拖尾,對(duì)于堿性化合物,相對(duì)較低的PH值更有利于得到對(duì)稱峰。
2、前沿峰
1、
樣品過載
:
被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續(xù)出來,形成前沿峰。
降低樣品含量。
2、
樣品溶劑選擇不恰當(dāng)
:
當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰,例如,在反相色譜中用已腈做樣品溶劑,而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰。
選擇流動(dòng)相或者接近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑。
3、
色譜柱損壞
:
色譜柱柱效損失,不能對(duì)物質(zhì)形成保留。
更換色譜柱。
4、
在大峰前有小峰出現(xiàn),假象前沿峰,即大峰前包埋了沒有分開的小峰。
調(diào)整流動(dòng)相洗脫梯度。
3、倒峰
1、樣品折射率小:
示差折光檢測(cè)器測(cè)的信號(hào)是折射率,出現(xiàn)倒峰的原因是組分的折射率小于流動(dòng)相。
2、密度的原因:
密度不一樣,出來的峰正倒不一樣。
3、進(jìn)樣所致:
進(jìn)樣時(shí),樣品對(duì)原有流動(dòng)相產(chǎn)生瞬間阻斷,然后瞬間涌流,所以產(chǎn)生先倒后高的“溶劑峰”。
4、基本不可避免:
試著使用與流動(dòng)相相同的溶劑作為溶樣溶劑,另外進(jìn)樣之前注意平衡跟沖洗參比池。
倒峰基本上不能避免,但是這樣操作會(huì)小些。
4、包裹
1、色譜柱問題:
色譜柱流失,柱子被污染。
2、樣品溶解度差:
溫度可能會(huì)影響到溶解度。
3、流動(dòng)相不均勻:
一般是流動(dòng)相沒配好,管路流動(dòng)相不均勻,也會(huì)導(dǎo)致上述現(xiàn)象。
5、基線漂移
1、
柱溫波動(dòng)
:
即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng),通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。
使用柱溫箱,控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測(cè)器之前使用熱交換器。
2、流動(dòng)相不均勻
:
流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。
使用HPLC級(jí)的溶劑,流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理。
3、
流通池被污染或有氣體
:
用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。
如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
4、
流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化
:
更改配比或流速,為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。
5、
樣品中有強(qiáng)保
留的物質(zhì)
:
以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。
使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
6、出現(xiàn)寬峰
1、
色譜柱污染或失效
,造成塔板數(shù)降低:
更換同樣類型的色譜柱,如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰,則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。
2、
柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大
:
更換內(nèi)徑較小的短管路。
3、
檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大
:
減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池。
7、基線噪音
1、
在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣(尖銳峰)
:
流動(dòng)相脫氣,沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。
2、
漏液
:
檢查管路接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。
如有必要,更換泵密封。
3、
流動(dòng)相混合不完全
:
用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑。
4、
溫度影響(柱溫過高,檢測(cè)器未加熱)
:
使用柱溫箱,減少溫度差異或加上熱交換器。
5、
在同一條線上有其他電子設(shè)備(偶然噪聲)
:
斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。
采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源。
8、分離度不夠
1、
流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)置不合理
:
優(yōu)化梯度洗脫程序。
2、
流動(dòng)相污染或變質(zhì)(引起保留時(shí)間變化)
:
重新配置流動(dòng)相。
3、
保護(hù)柱或分析柱阻塞
:
去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析,如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱;
如果分析柱阻塞,可進(jìn)行反沖;
如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颍?/span>
如果問題仍然存在,進(jìn)口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。
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