HPLC和LC/MS 緩沖液選擇指南：緩沖液的制備

緩沖液有四種常用的制備技術(shù)，本文中將分別簡(jiǎn)要介紹。

緩沖液配方很容易查找，因此這里并未列出。許多生物化學(xué)和化學(xué)文獻(xiàn)中均包含緩沖液的相關(guān)表格；附錄[3]提供了用于HPLC的緩沖液配方匯編。

卓越的在線工具[4]會(huì)提示目標(biāo)緩沖液的pH值、濃度和體積，然后生成配方。

制備緩沖液的最佳方法是根據(jù)配方稱量緩沖液組分，并用水稀釋至所需的體積。

最初，您可能覺(jué)得這一過(guò)程十分枯燥，但它更為準(zhǔn)確，而且通常比pH調(diào)節(jié)技術(shù)更快；在不同時(shí)間和實(shí)驗(yàn)室可以實(shí)現(xiàn)輕松再現(xiàn)。

該技術(shù)提供了所需濃
度和pH值的緩沖液。配制后應(yīng)檢查pH值，確保未出現(xiàn)任何錯(cuò)誤。

另一種可選的緩沖液制備技術(shù)是：首先制備單獨(dú)的酸性和堿性緩沖液（例如分別具有10mM的磷酸和磷酸鹽）。然后將兩種溶液混合，并用pH計(jì)監(jiān)測(cè)pH，直至其達(dá)到所需的pH值。

這樣不僅可以提供所需濃度的緩沖液，還能夠具有與pH計(jì)讀數(shù)接近的pH值（通常使用±0.1個(gè)pH單位）。

混合酸和堿等摩爾溶液時(shí)，可以首先將一種組分配制為所需濃度（例如10mM的磷酸鹽），然后再使用濃酸（例如磷酸）滴定，直至達(dá)到所需的pH。該緩沖液將比等摩爾混合物更濃，但目標(biāo)pH值應(yīng)正確（在pH計(jì)的界限內(nèi)）。

最后，“improper”緩沖液制備技術(shù)應(yīng)該被提及。

這就是在加入有機(jī)溶劑后調(diào)節(jié)pH值。盡管有機(jī)溶劑存在時(shí)可以獲得pH值讀數(shù)[5-7]，但不能直接與水狀pH值的測(cè)量結(jié)果進(jìn)行比較，因此pH的數(shù)值并不具有實(shí)際意義。

這種技術(shù)也比其它制備方法更易受其它因素（如有機(jī)物比例、溫度）的影響，因此應(yīng)盡量避免。

盡管如此，對(duì)于大多數(shù)方法來(lái)說(shuō)，是否按重量、等摩爾混合或采用濃酸滴定等方法配制緩沖液并不會(huì)有較大影響，但某些方法會(huì)對(duì)細(xì)微差異較為敏感。

鑒于此，文檔應(yīng)包含緩沖液制備技術(shù)的相關(guān)說(shuō)明。